孢子提取与清洗

方法：土壤或盆栽培养物中AMF孢子的分离提取采用湿筛倾析法。

工具：土壤标准筛（孔径为上层0.8 mm，中层0.25 mm，下层0.055 mm）、搅拌器。

流程：称取菌剂或土壤放入搅拌机烧杯中→加水至杯1/3→高速搅拌10~15 s →悬液依次通过3个土壤标准筛→反复冲洗菌剂或土壤直到悬液清澈（大部分粗沙砾残余物留在烧杯中）→流水冲洗每层筛子直至流出清水→用洗瓶将筛中的残余物轻轻冲洗汇集到筛子的一边→倒入培养皿中→体式显微镜下观察孢子。

上层筛子（孔径0.25 mm）一般不做离心处理，因为有很多有机质，经过洗涤、转移到培养皿中，在体视显微镜下观察。

下层筛（孔径0.055 mm）中全部残余物转移入100 mL的离心管→加水至离心管的2/3处→ 3000 rpm离心4 min →弃悬浮杂质→上清液转移到培养皿中→体式显微镜下观察孢子；

离心管中加入45%蔗糖溶液至离心管的2/3处→玻璃棒搅拌均匀→ 3000转离心1.5 min →蔗糖溶液转移入孔径0.055 mm的筛中→反复冲洗掉蔗糖→筛中的残余物轻轻冲洗转移到培养皿中→体式显微镜下观察孢子。

在体视显微镜下，用解剖针将孢子与有机无机碎屑分离，最后将孢子按形态分开，用移液器或毛细吸管吸出，放入表面皿中备用，表面皿置于培养皿中以减少蒸发。根据实验需要进行分类鉴定、纯种培养等。

注意：为使土壤完全分散开，对于黏性或结块较大的土壤，可以先在水中浸泡20~30 min，必要时土样可以放在六偏磷酸钠溶液中。