分子生物学鉴定方法

DNA提取：

1. 从纯化的培养物筛取孢子，挑出有活力的孢子，用灭菌的蒸馏水洗净；

2. 将3-20个孢子用移液器转移到1.5 mL的灭菌离心管底部，使水尽量少，将装有孢子的离心管置于冰上；

3. 将水浴锅开到94℃，将Taq聚合酶配套的buffer解冻后置于冰上；

4. 用枪头将孢子捣碎，使其内容物释放出来。该过程也要在体视镜下进行，以便能看到孢子和确保内容物（包含DNA）释放出来。因为孢子周围液体很少，因此不会有太多滑动。

5. 将枪头在离心管底部的壁上边刮边拿出来，使得孢子不会被带出来；

6. 一旦孢子破碎，立即向离心管中加入10 ul冰的Taq聚合酶buffer，立即放入94℃水浴4min使得DNA酶失活；

7. 水浴4 min之后，立即将离心管置于冰上，这个时候DNA可被用于PCR扩增或者保存于-20℃。

参考：https://invam.ku.edu/dna-extraction（里面有一些图片）

PCR扩增与克隆测序：

引物使用：

测序结果通过Blast比对。

PCR条件参考文献：